طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی-بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی‌تنسیس سویه Rev1 جهش‌یافته برای تولید سویه کاندید واکسن

Authors

  • دلدار, علی اصغر گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران
  • زین الدینی, مهدی گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران
  • سعیدی نیا, علیرضا گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران
  • نساجی, زهرا گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران
Abstract:

زمینه و اهداف: بروسلوز از مهم‌ترین بیماری‌های مشترک انسان و دام محسوب می‌گردد. بهترین راه مقابله با بروسلوز انجام واکسیناسیون مناسب می­باشد. واکسن­های موجود از قبیل واکسن Rev1 با معایبی چون سقط جنین در حیوانات باردار همراه است لذا تهیه واکسن مناسب برای درمان بروسلوز ضروری می­ باشد. هدف از انجام این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی­بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی­تنسیس سویه Rev1 جهش­یافته برای تولید سویه کاندید واکسن بود. مواد و روش کار: در این مطالعه برای حذف ترادف هدف، تصمیم به استفاده از پلاسمید pDS132 به عنوان وکتور خودکشی گرفته شد. بمنظور ساخت کاست حذف، پس از طراحی و سنتز جداگانه قطعات دارای همولوژی با ترادف­های هدف، این قطعات جهت ساخت قطعه واحد، با استفاده از آنزیم­های محدودگر مناسب در وکتور pBluescriptSK(-) کلون شد. سپس به منظور ساخت وکتور خودکشی، قطعه کاست حذف با استفاده از آنزیم­ های محدودگر مناسب از وکتور فوق جدا و در وکتور pDS132 ساب کلون شد. یافته‌ها: وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR با در برداشتن 590 جفت باز از توالی بالادست و 421 جفت باز از توالی پایین­دست ترادف هدف می­تواند به عنوان یک ناقل خودکشی اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن kanR در ژنوم باکتریبروسلا ملی­تنسیس سویه Rev1 جهش ­یافته موجب حذف مقاومتآنتی­ بیوتیکی در آن بشود. نتیجه‌گیری: استفاده از سیستم خودکشی مورد نظر با استفاده از وکتور pDS132-ΔkanR، ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش­ های خودکشی وابسته به مارکر مثبت و نیز روش‌های ابتدایی مانند پاساژ متوالی، روش موثرتری می­باشد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

طراحی و ساخت وکتور خودکشی pds۱۳۲-δkanr به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی-بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی تنسیس سویه rev۱ جهش یافته برای تولید سویه کاندید واکسن

زمینه و اهداف: بروسلوز از مهم ترین بیماری های مشترک انسان و دام محسوب می گردد. بهترین راه مقابله با بروسلوز انجام واکسیناسیون مناسب می­باشد. واکسن­های موجود از قبیل واکسن rev1 با معایبی چون سقط جنین در حیوانات باردار همراه است لذا تهیه واکسن مناسب برای درمان بروسلوز ضروری می­ باشد. هدف از انجام این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور خودکشی pds132-δkanr به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی­بیوتیک کانامایسین د...

full text

حذف ژن پروزامین سنتتاز در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 بمنظور تولید سویه ضعیف شده

مقدمه: هدف از این مطالعه، انجام حذف ژنی در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 به منظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، بود. بدین منظور تلاش گردید تا ژن کدکننده آنزیم پروزامین سنتتاز(per) ، یکی از ژن‏های درگیر در تشکیل ساختار زنجیره O از LPS دیواره باکتری، از طریق انجام نوترکیبی همساخت حذف گردد. مواد و روش‏ها: نوترکیبی همساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذف که شامل ترادف نوکلئوتیدی کدکننده مق...

full text

همسانه سازی و بیان ژن پروتین غشای خارجی 31 (Omp31) باکتری بروسلا ملیتنسیسRev1

بیماری بروسلوز به عنوان یک بیماری مشترک بین انسان و دام به واسطه تکثیر باکتری بروسلا در داخل سلول‌های پستانداران اتفاق می‌افتد. Omp31 یکی از پروتئین‌های غشای خارجی این باکتری می‌باشد که به واسطه نقش مهمی که در تحریک سلول‌های CD8+ T و CD4+ T دارد می‌تواند سبب مهار بیماری بروسلوز گردد. در این بررسی ژن Omp31 به عنوان یکی از ژن های موثر در بیماری بروسلا مورد بررسی مولکولی از نظر آنالیز فیلوژنی و هم...

full text

حذف ژن پروزامین سنتتاز در باکتری بروسلا ملی تنسیس rev۱ بمنظور تولید سویه ضعیف شده

مقدمه: هدف از این مطالعه، انجام حذف ژنی در باکتری بروسلا ملی تنسیس rev1 به منظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، بود. بدین منظور تلاش گردید تا ژن کدکننده آنزیم پروزامین سنتتاز(per) ، یکی از ژن‏های درگیر در تشکیل ساختار زنجیره o از lps دیواره باکتری، از طریق انجام نوترکیبی همساخت حذف گردد. مواد و روش‏ها: نوترکیبی همساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذف که شامل ترادف نوکلئوتیدی کدکننده مقاو...

full text

دستکاری ژنتیکی سویه آکرومونیومی تولید کننده سفالوسپورین c به منظور افزایش تولید این آنتی بیوتیک

میزان تولید سفالوسپورین c(cpc) در سویه های تولید کننده این ماده در ارتباط با میزان ابراز یا مهار ژنهای تولید کننده آن است. هدف از این مطالعه تغییر ژنتیکی سویه تولید کننده سفالوسپورین c به منظور افزایش تولید این ماده بوده است. در این بررسی از سویه استاندارد تولید کننده آکرومونیوم کرایزوژنوم 2399dsm به عنوان سویه والد استفاده شد. عملیات موتاژنز روی محیطهای تولید بهینه سازی شده با بستر جامد صورت گ...

full text

طراحی و ساخت حامل انتحاری pds۱۳۲::∆virg به منظور حذف ژن virg در شیگلا فلکسنری ۲a برای تولید سویه واکسنی زنده تخفیف حدت یافته شیگلا

زمینه و هدف: سویه های شیگلا باکتری های گرم منفی هستند که واجد توانایی ورود به درون سلول های غیر فاگوسیتیی، از طریق ترشح پروتئین های افکتور (که آنتی ژن های تهاجمی نامیده می شوند (ipas)) می باشند. یکی از مهمترین آنها پروتئینvirg است. واکسن های زنده تخفیف حدت یافته شیگلا، پاسخ های امیدوار کننده ای را در ایجاد ایمنی حفاظتی در مطالعات بالینی بر روی انسان از خود نشان داده اند. در شرایط حاضر، ساخت سوی...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 10  issue 2

pages  23- 32

publication date 2016-07

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023